高效液相(xiāng)色譜(pǔ)儀基(jī)本(běn)原理(lǐ)，應用及常(cháng)見(jiàn)故障
1，高效液相(xiāng)色(sè)譜(pǔ)儀的(dí)係(xì)統組成(chéng)，工(gōng)作原(yuán)理(lǐ)
高效液相色(sè)譜(pǔ)儀的係統由儲液器，泵，進(jìn)樣器，色(sè)譜(pǔ)柱，檢測器(qì)，記(jì)錄儀(yí)等(děng)幾部分(fēn)組(zǔ)成。儲液(yè)器中的流動相(xiāng)被高壓泵打入係(xì)統，樣品(pǐn)溶液(yè)經(jīng)進樣器(qì)進入流(liú)動相，被(bèi)流動相載入色譜柱(zhù)（固定(dìng)相(xiāng)）內(nèi)，由(yóu)於樣品溶液中的(dí)各組分在(zài)兩相中具有不(bù)同(tóng)的(dí)分(fēn)配(pèi)係數，在(zài)兩相(xiāng)中作相(xiāng)對(duì)運動時，經過反(fǎn)復(fù)多(duō)次(cì)的(dí)吸附- 解(jiě)吸的分配過程，各組分在移(yí)動(dòng)速度(dù)上(shàng)產(chǎn)生較大的(dí)差別(bié)，被分離成單(dān)個組分(fēn)依(yī)次(cì)從柱內流出(chū)，通(tōng)過檢(jiǎn)測器(qì)時，樣品(pǐn)濃(nóng)度被轉換(huàn)成(chéng)電(diàn)信號(hào)傳(chuán)送到(dào)記錄(lù)儀(yí)，數(shù)據(jù)以圖譜(pǔ)形式打印(yìn)出(chū)來。
2，高效(xiào)液相(xiāng)色(sè)譜(pǔ)儀的(dí)應(yīng)用(yòng)
高(gāo)效液相色(sè)譜法隻要求樣品能製(zhì)成(chéng)溶(róng)液(yè)，不受樣品揮發性(xìng)的限(xiàn)製(zhì)，流動(dòng)相可(kě)選擇(zé)的範(fàn)圍(wéi)寬，固定相的(dí)種類繁(fán)多(duō)，因而可(kě)以(yǐ)分離(lí)熱不穩(wěn)定和非(fēi)揮(huī)發性(xìng)的(dí)，離解(jiě)的(dí)和(hé)非(fēi)離解的以(yǐ)及(jí)各種分(fēn)子量範(fàn)圍的物(wù)質(zhì)。與(yǔ)試(shì)樣(yàng)預(yù)處(chǔ)理技(jì)術相(xiāng)配(pèi)合，HPLC所達到的高分辨(biàn)率和高(gāo)靈敏度(dù)，使(shǐ)分離和同時測(cè)定性質(zhì)上十(shí)分相(xiāng)近的物質成為可(kě)能，能夠(gòu)分(fēn)離(lí)復(fù)雜(zá)相體中的微量成(chéng)分。
隨著固(gù)定相的(dí)發展(zhǎn)，有(yǒu)可(kě)能在(zài)充分(fēn)保持(chí)生化(huà)物質活性的(dí)條(tiáo)件(jiàn)下完(wán)成(chéng)其(qí)分(fēn)離(lí)。HPLC成為解(jiě)決生(shēng)化(huà)分析(xī)問(wèn)題最有前(qián)途(tú)的方法(fǎ)。由於HPLC具(jù)有(yǒu)高分辨率(shuài)，高靈(líng)敏度，速度(dù)快，色譜柱可反(fǎn)復利用，流出(chū)組分(fēn)易收集(jí)等優(yōu)點(diǎn)，因(yīn)而被廣泛(fàn)應(yīng)用到生(shēng)物(wù)化(huà)學，食(shí)品分析，醫(yī)藥研(yán)究，環境(jìng)分析(xī)，無機分(fēn)析等各(gè)種(zhǒng)領(lǐng)域(yù)。高(gāo)效液相色譜(pǔ)儀與結(jié)構(gòu)儀(yí)器的聯用(yòng)是(shì)一(yī)個(gè)重要的(dí)發(fā)展方向。液(yè)相色(sè)譜- 質譜(pǔ)連用(yòng)技(jì)術(shù)受到(dào)普遍(biàn)重視，如分析氨基甲酸(suān)酯(zhǐ)農(nóng)藥(yào)和多核芳烴(tīng)等；液相色譜- 紅外光譜聯(lián)用也(yě)發展很(hěn)快(kuài)，如(rú)在(zài)環境汙染(rǎn)分析測定水(shuǐ)中的烴(tīng)類，海水(shuǐ)中的不(bù)揮發烴類，使環境汙(wū)染(rǎn)分析(xī)得到(dào)新的發(fā)展(zhǎn)。
3，高(gāo)效液相色(sè)譜儀(yí)常(cháng)見故(gù)障(zhàng)處理(lǐ)
LC-10AT高(gāo)效液相色(sè)譜儀(yí)是日本島(dǎo)津公司(sī)1996年(nián)的(dí)產品(pǐn)，檢測器為可變波(bō)長(cháng)紫外(wài)檢(jiǎn)測器，色(sè)譜柱(zhù)為島(dǎo)津公司(sī)的ODS-C18，大(dà)連(lián)依(yī)利特(tè)的ODS-C18。八年(nián)的日常工作中遇到了(liǎo)幾(jī)種故障，如故障1經咨詢(xún)島津公(gōng)司的工(gōng)程(chéng)師後，得(dé)以(yǐ)解決；故障(zhàng)2，故(gù)障5是(shì)頻(pín)繁碰到的(dí)問題等，特作總結如下：
故障1 流動(dòng)相內有氣(qì)泡(pào)，關閉(bì)泵，打(dǎ)開泄(xiè)壓閥，打(dǎ)開(kāi)purge鍵，清(qīng)洗脫(tuō)氣，氣泡不斷從過濾(lǜ)器冒出(chū)，進入流動相，無論打(dǎ)開purge鍵幾(jī)次(cì)，都(dū)無(wú)法清除(chú)不斷產(chǎn)生的氣(qì)泡(pào)。
原(yuán)因過(guò)濾器長(cháng)期(qī)沉浸(jìn)於乙酸(suān)銨(ǎn)等(děng)緩衝液內，過濾器(qì)內部(bù)由於(yú)黴(méi)菌的生(shēng)長(cháng)繁殖，形成(chéng)菌團(tuán)，阻塞了過(guò)濾(lǜ)器，緩衝(chōng)液難(nán)以流暢(chàng)地(dì)通(tōng)過過濾器(qì)，空(kōng)氣在(zài)泵的(dí)壓(yā)力作(zuò)用下經(jīng)過濾器進(jìn)入(rù)流動相。
處理(lǐ)過濾器浸泡於5%硝酸(suān)溶液(yè)中(zhōng)，超(chāo)聲清洗幾(jī)分鐘即(jí)可；亦可將(jiāng)過濾器浸泡於5%硝酸(suān)溶液(yè)中(zhōng)12～36小時(shí)，輕輕(qīng)震蕩(dàng)幾次(cì)，再將(jiāng)過(guò)濾(lǜ)器(qì)用純水清洗幾次，打開(kāi)泄壓(yā)閥(fá)，打(dǎ)開(kāi)purge 鍵(jiàn)，清洗(xǐ)脫氣，如(rú)仍有(yǒu)氣(qì)泡不(bù)斷(duàn)從過(guò)濾(lǜ)器(qì)冒出，繼續(xù)將(jiāng)過濾器(qì)浸泡於(yú)5%硝酸溶液中，如(rú)沒有氣泡(pào)不(bù)斷(duàn)從(cóng)過濾器中冒出(chū)，說明過濾(lǜ)器(qì)內(nèi)部的(dí)黴菌菌(jūn)團(tuán)已被(bèi)硝酸破壞，流(liú)動相(xiāng)可(kě)以(yǐ)流暢(chàng)地通過(guò)過濾器(qì)。打(dǎ)開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)泵，流(liú)速調至(zhì)1.0～3.0ml/min ，純水衝洗(xǐ)過濾(lǜ)器1小(xiǎo)時左(zuǒ)右。即可將(jiāng)過(guò)濾器清洗(xǐ)幹淨(jìng)。關(guān)閉(bì)泄(xiè)壓(yā)閥(fá)，純(chún)甲(jiǎ)醇衝洗(xǐ)半(bàn)小時(shí)即可。
故障(zhàng)2 柱壓(yā)高
原(yuán)因（1）緩(huǎn)衝液鹽分如（乙酸銨等(děng)）沉(chén)積(jī)於(yú)柱內；（2）樣品(pǐn)汙(wū)染(rǎn)沉積。
處(chǔ)理對(duì)於(yú)第(dì)一種情(qíng)況先用40～50 ℃的純水(shuǐ)，低速正(zhèng)向(xiàng)衝洗柱(zhù)子，待柱壓(yā)逐(zhú)漸(jiàn)下降(jiàng)後，相應提(tí)高流(liú)速衝(chōng)洗(xǐ)，柱(zhù)壓大(dà)幅度(dù)下(xià)降後， 用(yòng)常(cháng)溫(wēn)純水(shuǐ)衝(chōng)洗，之後用純甲醇衝洗(xǐ)柱子30 分(fēn)鐘(zhōng)；對(duì)於第(dì)二(èr)種情況(kuàng)，由樣(yàng)品(pǐn)的(dí)沉(chén)積(jī)引起汙染(rǎn)的C18柱(zhù)，用純(chún)水反向衝洗柱(zhù)子(zǐ)， 然後換(huàn)成(chéng)甲(jiǎ)醇衝洗(xǐ)，接著(zhuó)用(yòng)甲醇(chún)+異丙(bǐng)醇(chún)（4+6）衝洗柱子（衝(chōng)洗(xǐ)時(shí)間的(dí)長短由樣品(pǐn)汙染的情況而定），再用換成(chéng)甲醇衝洗，然後(hòu)用(yòng)純水衝(chōng)洗，最(zuì)後甲(jiǎ)醇衝洗(xǐ)正向(xiàng)衝(chōng)洗柱子30分(fēn)鐘以上。
故障(zhàng)3 既無壓力(lì)指示(shì)，又無液體(tǐ)流過。
原(yuán)因(yīn)（1）泵(bèng)密封墊圈(quān)磨(mó)損(sǔn)；（2）大(dà)量氣泡(pào)進入泵(bèng)體。
處理對(duì)於(yú)第一種(zhǒng)情況(kuàng)，更(gēng)換密封(fēng)墊圈(quān)；對於第二(èr)種情況(kuàng)，在(zài)泵(bèng)作用(yòng)的同時(shí)，用(yòng)一個(gè)50ml的(dí)玻璃針筒(tǒng)在泵的出口(kǒu)處幫助(zhù)抽(chōu)出(chū)空氣。
故障4 壓力波(bō)動(dòng)大，流量(liáng)不穩(wěn)定。
原因係統中有空(kōng)氣或者單(dān)向(xiàng)閥(fá)的寶石球(qiú)和閥(fá)座之(zhī)間夾(jiā)有異(yì)物(wù)，使得(dé)兩者(zhě)不(bù)能密(mì)封。
處理工(gōng)作(zuò)中注意觀察流動(dòng)相(xiāng)的量， 保(bǎo)證不鏽鋼濾器(qì)沉入儲液器瓶(píng)底，避(bì)免吸(xī)入空(kōng)氣(qì)，流(liú)動(dòng)相(xiāng)要充分脫氣。如為單(dān)向(xiàng)閥和(hé)閥(fá)座(zuò)之間夾(jiā)有異物(wù)，拆(chāi)下(xià)單(dān)向閥(fá)，放(fàng)入(rù)盛(shèng)有丙(bǐng)酮的(dí)燒(shāo)杯用超聲波(bō)清洗(xǐ)。
故(gù)障(zhàng)5 出(chū)峰不(bù)佳，峰分叉(chā)。
原(yuán)因(yīn)（1）色(sè)譜(pǔ)柱(zhù)被(bèi)汙(wū)染(rǎn)；（2）柱頭填(tián)料塌(tā)陷。
處理(lǐ)對(duì)於(yú)第一種(zhǒng)情(qíng)況，先用純水反(fǎn)向衝(chōng)洗柱(zhù)子，然(rán)後換(huàn)成甲(jiǎ)醇衝洗，接著用甲(jiǎ)醇+異(yì)丙醇（4+6）衝洗柱子(zǐ)（衝洗時(shí)間的長(cháng)短由樣品汙染的情(qíng)況而定(dìng)），再換成(chéng)甲醇衝洗(xǐ)，然後(hòu)用(yòng)純(chún)水(shuǐ)衝(chōng)洗(xǐ)，最(zuì)後甲(jiǎ)醇(chún)衝洗正向(xiàng)衝(chōng)洗(xǐ)柱(zhù)子(zǐ)30分(fēn)鐘(zhōng)以(yǐ)上(shàng)。如衝(chōng)洗後依(yī)然出(chū)峰不(bù)佳(jiā)，則考(kǎo)慮(lǜ)第二種情況(kuàng)。對於第二(èr)種(zhǒng)情(qíng)況，擰開柱頭(tóu)，檢(jiǎn)查柱填(tián)料是(shì)否(fǒu)硬結或(huò)塌(tā)陷。去除硬結部分（汙染的(dí)填料），裝(zhuāng)入(rù)新填料，滴(dī)一(yī)滴(dī)甲醇(chún)，填料下陷(xiàn)，再填，用(yòng)與柱內(nèi)徑(jìng)相同的頂端平滑的(dí)不(bù)鏽(xiù)鋼(gāng)杆(gān)壓緊，再(zài)填(tián)平，滴(dī)甲醇，再壓緊反(fǎn)復幾次(cì)，直至裝(zhuāng)滿(mǎn)填(tián)平。柱頭(tóu)用(yòng)甲(jiǎ)醇(chún)衝(chōng)洗(xǐ)幹(gān)淨，擦淨柱外(wài)壁(bì)的填(tián)料，擰緊(jǐn)柱(zhù)頭，用(yòng)純甲醇衝洗30分鐘以上。
故(gù)障6 峰麵(miàn)積(jī)重復性不佳(jiā)。
原(yuán)因（1）進(jìn)樣閥(fá)漏(lòu)液(yè)；（2）加樣(yàng)針不(bù)到位(wèi)。
處(chǔ)理(lǐ)對(duì)於第(dì)一(yī)種情況(kuàng)更(gēng)換(huàn)進樣(yàng)閥墊(diàn)圈(quān)；對(duì)於(yú)第(dì)二種情(qíng)況保(bǎo)證(zhèng)加樣針插到底，注(zhù)射樣品溶(róng)液後須快(kuài)速，平穩(wěn)地(dì)從LOAD狀態(tài)轉換(huàn)到INJECT 狀態(tài)，以(yǐ)保(bǎo)證(zhèng)進樣(yàng)量的(dí)準確。日(rì)常工(gōng)作中(zhōng)，液相色譜儀的保養非常重(zhòng)要，如要(yào)注(zhù)意(yì)不(bù)要(yào)讓(ràng)空氣(qì)進入輸(shū)液係(xì)統(tǒng)和高壓(yā)泵中，儲液器內(nèi)的溶(róng)液(yè)如長(cháng)時(shí)間未(wèi)用應清(qīng)洗儲液器並更換(huàn)溶液，每(měi)次用完(wán)色譜儀後(hòu)緩衝(chōng)液要(yào)用純(chún)水(shuǐ)衝洗(xǐ)幹淨(jìng)，防止(zhǐ)無機(jī)鹽(yán)析(xī)出或沉(chén)積；樣品的前處(chǔ)理也(yě)很重(zhòng)要(yào)，任何(hé)樣品都(dū)要盡可能(néng)地去(qù)除雜質(zhì)，完(wán)quan溶(róng)解，盡量減少(shǎo)對(duì)色(sè)譜(pǔ)柱的汙(wū)染，以延長色譜(pǔ)柱的使用壽(shòu)命，同(tóng)時避免注(zhù)射過(guò)濃(nóng)的(dí)樣(yàng)品溶液(yè)，以免殘留(liú)液在進樣(yàng)閥內析(xī)出固(gù)體引(yǐn)起堵(dǔ)塞；色(sè)譜(pǔ)柱(zhù)作好標(biāo)記，用於(yú)不(bù)同分析目(mù)的(dí)的色(sè)譜(pǔ)柱不(bù)要混(hùn)用(yòng)等。